
استخراج RNA کل از سلول و بافت ها به روش ستونی
این کیت در اندازه 25 و 50 و 100 تستی ارائه می شود .
تنها برای مصارف تحقیقاتی (RUO) است.
11,700,000 تومان – 3,960,000 تومانPrice range: 3,960,000 تومان through 11,700,000 تومان
کیت نورکس پلاس برای استخراج RNA کل از سلول و بافت ها به روش ستونی کاربرد دارد. این کیت در اندازه 25 و 50 تستی ارائه می شود و تنها برای مصارف تحقیقاتی (RUO) است.
شرایط نگهداری:
برای استفاده طولانی مدت این کیت در دمای 2-8 درجه سانتی گراد نگهداری می شود.
نکات مهم قبل از شروع:
** از دستکش در کل روند، و از شیلد در هنگام هموژن کردن بافت ها استفاده کنید.
مراحل کار :
1) لیز سلول یا بافت بوسیله بافر NL.
** لیز کردن سلول ها: سلول های سوسپانسیونی حاصل از کشت یا حاصل از مایعات بدنی را قبل از لیز سانتریفیوژ کرده و700 مایکرولیتر از بافر NL را بر روی پلت سلولی بریزید و کاملا با پیپتاژ کردن سلول هارا ریساسپند کنید. برای سلول های چسبنده کشت شده در پلیت ها، بافر NL را میتوانید مستقیما داخل ول های پلیت ریخته و چند بار پیپتاژ کنید.
** لیز کردن نمونه های بافتی: 10-50 میلی گرم بافت تازه یا بافت ذخیره شده را برای استخراج RNA استفاده کنید. اگر بافت ها در محلول محافظت کننده RNA (به عنوان مثال RNAguard از نوترکیب Cat Number: NAT0011) ذخیره شدهاند، قبل از لیز کردن، تمام محلول را از بافت خارج کنید. ابتدا 200 مایکرولیتر بافر NL را بر روی بافت بریزید و بافت را کاملا هموژنایز کنید. بعد از هموژنایز کامل، 500 مایکرولیتر بافر NL را بر روی بافت بریزید و به صورت مختصر پیپتاژ کنید.
2) سلول ها و بافت هموژن شده را به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید.
3) 200 مایکرولیتر کلروفرم بر روی محلول ریخته و میکروتیوب را به مدت 10 ثانیه به آرامی تکان دهید کرده و 5 دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید.
4) محلول را به مدت 10 دقیقه در دمای 4 درجه سانتی گراد با دور 13000 سانتریفیوژ کنید.
5) محلول رویی (بالاترین فاز که شفاف است) را به آرامی برداشته و در یک میکروتیوب 1.5 سرد شده بر روی کلد رک (یا یخ) بریزید.
6) 250 میکرولیتر الکل 75 درصد سرد بر روی محلول ریخته و به آرامی مخلوط کنید.
7) یک ستون را در داخل کالکشن تیوب گذاشته و محلول را به داخل ستون استخراج بریزید.
8) ستون را به مدت 1دقیقه با دور 12000 سانتریفیوژ کنید.
9) مایع جمع شده در کالشن تیوب را دور ریخته و 750 مایکرولیتر از محلول NW را داخل ستون ریخته و به مدت 1 دققه در دور 12000 سانتریفیوژ کنید.
اختیاری: برای بدست آوردن خلوص بالای RNA، 500 مایکرولیتر از بافر NW را داخل ستون ریخته و مرحله 9 را تکرار کنید.
10) محلول جمع شده در کالکشن تیوب را دور ریخته و بار دیگر ستون خالی را 2 دقیقه در 12000 دور سانتریفیوژ کنید تا محلول NW کاملا از ستون خارح شود.
11) ستون را در یک کالکشن تیوب جدید گذاشته و 50 مایکرولیتر آب DEPC Treated به مرکز سیلیکای ستون بریزید و ستون را 3 دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید.
12) ستون را در 13000 دور به مدت 2 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع جمع شده در کالکشن تیوب حاوی RNA خالص است که برای غلظت سنجی یا تست های بعدی آماده مصرف است.

تصویر 1
تصویر 2
RNA استخراج شده با کیت نورکس پلاس:
شماره1: باندهای مشخص 28 و 18S بر روی ژل الکتروفورز
شماره 2: نرخ 26/280 و 260/230 RNA استخراجی با دستگاه نانودراپ که هیچگونه آلودگی پروتئینی و نمکی وجود ندارد.
شرکت نوترکیب آزما تشخیص (NAT Biotech) با مسئولیت محدود به شماره ثبت 616171 تولید کننده تخصصی محصولات بیوتکنولوژی مولکولی آماده ارائه کیت ها، مسترمیکسها، مواد و تجهیزات مورد نیاز تست های مولکولی به تمامی محققین و فعالین دانشگاهی در حوزه های پزشکی، زیست شناسی، ژنتیک، کشاورزی، تغذیه و … می باشد.
نظر
هنوز نظری ثبت نشده است.