کیت اسخراج پلاسمید | Nopexmini
فقط برای مصارف تحقیقاتی ( RUO )
بر پایه ی ستون، برای 50 و 25 واکنش استخراج پلاسمید طراحی شده
ارائه سمپل رایگان این محصول برای محققان عزیز
- ارسال با یخ و حفظ زنجیره سرمایی
- تحویل کالا برای تهران 1 روز کاری برای شهرستان 2-4 روز
136 in stock
2,190,000 تومان
136 in stock
استخراج DNA پلاسمید در بیولوژی مولکولی کاربرد فراوانی دارد و یک گام ضروری در بسیاری از تکنیک ها مانند cloning، DNA sequencing، transfection و gene therapy به شمار می آید. تمامی این دستکاری های ژنتیکی، نیازمند تخلیص DNA پلاسمید با کیفیت بالا می باشند. روش های مختلفی برای استخراج پلاسمید از باکتری ها وجود دارد که یکی از روش های پرکاربرد که می تواند پلاسمید بسیار خالص و با حداقل آلودگی را مهیا کند؛ روش استخراج با ستون های سیلیکا می باشد. کیت اسخراج پلاسمید | Nopexmini یک کیت بر پایه ستون برای تخلیص پلاسمید می باشد که می تواند مقدار قابل ملاحظه ای از پلاسمید را با کمترین آلودگی RNA یا مواد دیگر در اختیار شما قرار دهد.
مقدار پلاسمید استخراج شده بستگی به اندازه و نوع پلاسمید دارد، با این کیت شما با 5 میلی لیتر کشت باکتری می توانید برای پلاسمیدهای با کپی کم 3-تا 10 میکروگرم و برای پلاسمیدهای با کپی بالا 10 تا 25 میکروگرم بدست بیاورید.
کیت اسخراج پلاسمید | Nopexmini، یک روش سریع، ساده و مقرون به صرفه را برای استخراج پلاسمید فراهم آورده است. این کیت بر پایه ی ستون، برای 50 و 25 واکنش استخراج پلاسمید طراحی شده است. DNA ی استخراج شده با NBprep plasmid extraction kit بلافاصله آماده ی استفاده می باشد. با استفاده از این کیت، نیازی به استخراج با فنول و رسوب دهی با اتانول نیست، بنابراین در کمترین زمان می توان پلاسمید با کیفیت بالا استخراج کرد.
کیت استخراج پلاسمید برای کاربردهای بیولوژی مولکولی شامل
- PCR
- Restriction digestion
- Ligation and transformation
- Sequencing
- Screening
تولید شده است و به هیچ عنوان برای تشخیص، پیشگیری و درمان بیماری ها کاربرد ندارد.
شرایط نگهداری کیت:
می توان حداکثر تا 12 ماه، این کیت را در دمای اتاق (15 تا 25 درجه سانتی گراد) نگهداری کرد. برای نگهداری طولانی مدت می توانید کیت را در دمای 2 تا 8 درجه سانتی گراد نگهداری کنید. اگر بعد از نگهداری در دمای 2 تا 8 درجه سانتی گراد، هرگونه رسوبی در کف بطری ها دیده شد، این نشان از افت کیفیت یا خراب بودن محصول نیست، تنها کافی است قبل از استفاده، بافرها را تا دمای 37 درجه سانتی گراد گرم کنید.
پروتکل و نحوه ی استفاده:
نکات مهم قبل از شروع:
- محلول RNase A را به بافر NB-P1 اضافه کرده و به خوبی مخلوط نمایید. سپس در دمای 2 تا 8 درجه ی سانتی گراد نگهداری کنید.
- قبل از استفاده، به بافر NB-PEاتانول (100-96%) اضافه کنید. ( با توجه به حجم ذکر شده بر روی برچسب بطری)
- تمامی مراحل سانتریفیوژ ، با دور(17900 x g) 13000 rpm انجام می شود.
مراحل کار :
در ابتدا، از روز قبل به مقدار 5ml کشت ثانویه از باکتری تازه، که به مدت یک شب یا به اندازه کافی که مخصوص نوع باکتری است رشد کرده اند تهیه کنید و روی یخ بگذارید. سپس مراحل زیر را انجام دهید:
- 1 تا 5 میلی لیتر از باکتری کشت داده شده را با دور 8000 rpm (6800 x g) به مدت 3 دقیقه در دمای اتاق ( 15-25 درجه سانتی گراد) سانتریفیوژ کنید تا پلت سلولی حاصل شود. سوپرناتانت را دور ریخته و در صورت نیاز این مرحله را تا اتمام محیط کشت باکتری خود تکرار کنید. بعد از آخرین مرحله حذف سوپرناتانت، با استفاده از یک سمپلر تمام محیط کشت را از روی پلت بردارید.
- پلت باکتریایی را در 250 میکرولیتر از بافر NB-P1 حل کنید. کاملا دقت کنید که هیچ توده یا کلافی از پلت دیده نشود و با پیپتاژ کردن یا ورتکس آرام تمامی پلت را به صورت یکنواخت در بافر شناور کنید.
- 250 میکرولیتر از بافر NB-P2 اضافه کنید؛ 4 تا 6 بار، میکروتیوب را سر و ته کرده تا به خوبی مخلوط شود و محلول شفافی به دست آید. بعد به مدت 5 دقیقه دردمای اتاق نگهداری کنیدو دقت کنید که اجازه ندهید این مرحله بیشتر از 5 دقیقه طول بکشد و همچنین از ورتکس یا تکان دادن شدید در این مرحله خود داری کنید چون باعث آسیب به پلاسمید و همچنین DNA ژنومی شده و آلودگی ایجاد خواهد کرد. لزج شدن محلول داخل میکوتیوب و کش آمدن آن هنگام باز کردن در میکروتیوب نشان دهنده لیز موفق می باشد. مانند تصویر زیر:
- 350 میکرولیتر از بافر NB-N3 اضافه کنید و بلافاصله 4 تا 6 بار میکروتیوب را سر و ته کنید تا کاملا مخلوط شود. به مدت 5 دقیقه محلول را بر روی یخ نگه داری کنید.
* نکته: توصیه می شود از قبل بافر NB-N3 را در یخچال سرد کنید تا نتیجه ی بهتری به دست آورید.
- محلول حاصل را به مدت 10 دقیقه با دور 13000 rpm ( 17900 x g) سانتریفیوژ کنید. بعد از سانتریفیوژ یک پلت بزرگ کشیده بر روی دیواره میکروتیوب ظاهر خواهد شد که نشان دهنده موفقیت آمیز بودن مرحله قبل است. پلت باید به رنگ سفید شیری باشد اگر رنگ پلت شفاف یا قهوه ای باشد نشان دهنده خطا است. به تصویر زیر دقت کنید:
- یک ستون تخلیص را برداشته و در داخل یک کالکشن تیوب یا تیوب جمع آوری بگذارید. سوپرناتانت حاصل از مرحله ی 5 را با سمپلر برداشته و در ستون تخلیص بریزید. سپس به مدت 30 تا 60 ثانیه سانتریفیوژ کنید و مایع جمع شده در تیوب جمع آوری را دور بریزید و ستون را دوباره در داخل تیوب قرار دهید.
- 750 میکرولیتر از بافر NB-PE را در ستون بریزید. سپس 30 تا 60 ثانیه سانتریفیوژ کنید و محلول جمع شده را دور بریزید.
- مجددا مرحله ی 7 را تکرار کنید.
- یکبار دیگر ستون را به مدت دو دقیقه با بیشترین دور سانتریفیوژ کنید تا باقیمانده ی بافر شستشو (بافر NB-PE ) حذف شود.
*نکته مهم: باقیمانده ی بافر NB-PE تنها در صورتی به طور کامل حذف می شود که قبل از این مرحله ی سانتریفیوژ اضافه، محلول جمع شده در تیوب جمع آوری دور ریخته شود. هر گونه باقیمانده ای از اتانول حاصل از بافر NB-PE ممکن است باعث مهار واکنش های آنزیمی بعدی شود.
- ستون را در یک کالکشن تیوب تمیز قرار دهید و 50 میکرولیتر از بافر NB-EB را درست در مرکز سیلیکای ستون بریزید. 1 تا 5 دقیقه منتظر بمانید و سپس به مدت یک دقیقه سانتریفیوژ کنید.
* نکته: توصیه می شود از قبل محلول NB-EB را در دمای 65 درجه ی سانتی گراد گرم کنید. این کار باعث بهبود شست و شوی پلاسمید و ریکاوری کلی از ستون می شود.
محلول جمع شده در کالکشن تیوب حاوی پلاسمید مورد نظر شما بوده و مستقیما برای فرآیندهای پایین دستی قابل استفاده است.
شرکت نوترکیب آزما تشخیص (NAT Biotech) با مسئولیت محدود به شماره ثبت 616171 تولید کننده تخصصی محصولات بیوتکنولوژی مولکولی آماده ارائه کیت ها، مسترمیکسها، مواد و تجهیزات مورد نیاز تست های مولکولی به تمامی محققین و فعالین دانشگاهی در حوزه های پزشکی، زیست شناسی، ژنتیک، کشاورزی، تغذیه و … می باشد.
نظرات
هیچ دیدگاهی نوشته نشده است.