کیت استخراج DNA از سلول و بافت | NodexPLUS

مراحل کار:

1) لیز سلول یا بافت بوسیله بافر Lysis.

** لیز کردن سلول ها: سلول های سوسپانسیونی حاصل از کشت یا حاصل از مایعات بدنی را قبل از لیز سانتریفیوژ کرده و 250 مایکرولیتر از بافرLysis  را بر روی پلت سلولی بریزید و کاملا با پیپتاژ کردن سلول هارا ریساسپند کنید.

** لیز کردن نمونه های بافتی: 10-50 میلی گرم بافت تازه یا بافت ذخیره شده استفاده کنید. ابتدا 150 مایکرولیتر بافر Lysis را بر روی بافت بریزید و بافت را کاملا هموژنایز کنید. بعد از هموژنایز کامل، 150 مایکرولیتر بافر Lysis دیگر را بر روی بافت بریزید و به صورت مختصر پیپتاژ کنید.

اختیاری: اگر وجود RNA در روند پایین دستی شم اختلال ایجاد میکند ، این مرحله را انجام دهید، در غیر این صورت ضرورتی ندارد. 4 میکرولیتر از RNAse A را به لیزات اضافه کرده و چندین بار آن را مخلوط کنید. نمونه را به مدت 5 دقیقع در دمای اتاق نگهداری کنید.

2) 20 میکرولیتر از پروتئیناز K را به لیزات اضافه کرده و به مدت 15 دقیقه در دمای 56 درجه انکوبه کنید.

مراحل کار:

1) لیز سلول یا بافت بوسیله بافر Lysis.

** لیز کردن سلول ها: سلول های سوسپانسیونی حاصل از کشت یا حاصل از مایعات بدنی را قبل از لیز سانتریفیوژ کرده و 250 مایکرولیتر از بافرLysis  را بر روی پلت سلولی بریزید و کاملا با پیپتاژ کردن سلول هارا ریساسپند کنید.

** لیز کردن نمونه های بافتی: 10-50 میلی گرم بافت تازه یا بافت ذخیره شده استفاده کنید. ابتدا 150 مایکرولیتر بافر Lysis را بر روی بافت بریزید و بافت را کاملا هموژنایز کنید. بعد از هموژنایز کامل، 150 مایکرولیتر بافر Lysis دیگر را بر روی بافت بریزید و به صورت مختصر پیپتاژ کنید.

2) 20 میکرولیتر از پروتئیناز K را به لیزات اضافه کرده و به مدت 15 دقیقه در دمای 56 درجه انکوبه کنید.

3) 200 میکرولیتر بافر NB را بر روی لیزات ریخته و به مدت 10 دقیقه دیگر در دمای 56 انکوبه کنید.

4) 200 میکرولیتر ایزوپروپانول  به لیزات اضافه کرده و آن را پیپتاژ کنید.

5) یک ستون را در داخل کالکشن تیوب قرار داده و لیزات را با دقت به داخل ستون بریزید. ستون را در دور 12000 به مدت یک دقیقه سانتریفیوژ کنید.

6) محلول جمع شده در داخل کالکشن تیوب را دور ریخته و ستون را دوباره داخل کالکشن تیوب قرار دهید. 750 میکرولیتر از بافر NW داخل ستون بریزید و به مدت یک دقیقه در 12000 دور سانتریفیوژ کنید.

7) مرحله اختیاری برای حصول خلوص بالا: محلول جمع شده در داخل کالکشن تیوب را دور ریخته و ستون را دوباره داخل کالکشن تیوب قرار دهید. 500 میکرولیتر از بافر NW داخل ستون بریزید و به مدت یک دقیقه در 12000 دور سانتریفیوژ کنید. محلول جمع شده در کالکشن تیوب را  دور بریزید.

8) یک بار دیگر ستون خالی داخل کالکشن تیوب را به مدت 2 دقیقه در دور 12000 سانتریفیوژ کنید تا باقی مانده محلول شست و شو کاملا از ستون خارج شود.

9) ستون را به داخل یک کالکشن تیوب
1.5mlتازه استریل منتقل کنید. 150 میکرولیتر بافر EB گرم شده در دمای 65 درجه را به ستون اضافه کنید. و به مدت 3 دقیقه در دمای اتاق انکوبه نمایید.

10) ستون را در 12000 دور به مدت 2 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع جمع شده در کالکشن تیوب حاوی DNA خالص است که برای غلظت سنجی یا تست های بعدی آماده مصرف می باشد.

دانلود کاتالوگ کیت استخراج DNA نودکس پلاس NodexPLUS