کیت استخراج DNA از خون | NodexBLOOD
RUO
محتوای اصلی این کیت در دمای اتاق
پروتئیناز K و RNase A در منفی 20 درجه نگهداری شود.
ارائه سمپل رایگان این محصول برای محققان عزیز
- ارسال با یخ و حفظ زنجیره سرمایی
- تحویل کالا برای تهران 1 روز کاری برای شهرستان 2-4 روز
65 in stock
2,450,000 تومان
65 in stock
کیت نودکس بلاد برای استخراج DNA ژنومی از سلول‌های WBC خون تازه برای تست های ژنتیکی به روش ستونی کاربرد دارد. این کیت در اندازه 25 و 50 تستی ارائه می شود و تنها برای مصارف تحقیقاتی (RUO) است.
محتویات کیت:
– بافرهای L1, L2, EB, NW, NB، آنزیم‌های RNase A, Prokپروتئیناز K, ستون سیلیکا و کالکشن تیوب.
مواد و وسایلی‌هایی که کیت ارائه نمی‌کند و باید قبل از انجام تست آماده کنید:
– میکروتیوب 1.5, ایزوپروپانول , آب دیونیزه استریل (آب تزریقی), الکل 96 درصد.
شرایط نگهداری و محتویات کیت:
– محتوای اصلی این کیت در دمای اتاق و پروتئیناز K و RNase A در منفی 20 درجه نگهداری شود.
نکات مهم قبل از شروع:
– از دستکش در کل روند استفاده کنید.
– خون را به محض نمونه گیری در داخل لوله CBC حاوی EDTA از نوع K2 یا K3 ذخیره کنید.
– قبل ازاستفاده از بافر NW برای اولین بار به مقدار 48 میلی لیتر الکل 96 درصد به آن اضافه کنید و قسمت مربع را تیک بزنید.
مراحل کار:
1. 500 میکرولیتر از نمونه خون تازه ( یا خون ذخیره شده حداکثر 1 هفته در دمای 4 درجه سانتی گراد ) را در یک میکروتیوب استریل 1.5 بریزید. برای استخراج حداکثر DNA ژنومیک میتوانید 300 میکرولیتر از بخش حاوی بافیوکیت ( بعد از سانتریفیوژ کردن در دور 2500 به مدت 5 دقیقه ) استفاده کنید.
2. 100 میکرولیتر از بافر L1 را روی آن ریخته و 900 میکرولیتر آب استریل دیونیزه به آن اضافه کنید محلول را کامل مخلوط کرده و به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق نگهداری کنید. هر یک دقیقهیک بار میکروتیوب را چندین بار سر و ته کنید.
3. محلول را در 2000 دور به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ کنید.
4. سوپرناتانت قرمز رنگ را به آرامی دور ریخته و پلت سفید را که حاوی سلول های WBC است نگه دارید.
5. 100 میکرولیتر بافر L1 را روی سلولها بریزید و 900 میکرولیتر آب دیونیزه استریل اضافه کنید. با پیپتاژ کردن سلول ها را کاملا ریساسگند کنید. اجازه دهید 2 دقیقه در دمای اتاق بماند. سپس محلول را در 2000 دور به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ کنید. محلول رویی قرمز را دور ریخته و پلت سفید را نگه دارید.
6. 5 میکرولیتر از RNAse A را به پلت اضافه کنید.
7. 250 میکرولیتر بافر L2 را بر روی پلت بریزید و کاملا پیپتاژ کنید تا پلت سلولی کاملا در بافر حل شود.
8. 20 میکرولیتر پروتئیناز K را به محلول اضافه کرده و به مدت 20 دقیق بر روی ترموشیکر در دمای 56 درجه و دور 250 در درقیقه انکوبه کنید.
9. 200 میکرولیتر بافر NB را بر روی لیزات ریخته و به مدت 10 دقیقه دیگر در دمای 56 بر روی ترموشیکر در دمای 56 درجه و دور 250 در دقیقه انکوبه کنید.
10. 200 میکرولیتر ایزوپروپانول به لیزات اضافه کرده و به خوبی مخلوط کنید.
11. یک ستون را در داخل کالکشن تیوب قرار داده و لیزات را با دقت به داخل ستون بریزید . ستون را در دور 12000 به مدت یک دقیقه سانتریفیوژ کنید.
12. محلول جمع شده در داخل کالکشن تیوب را دور ریخته و ستون را دوباره داخل کالکشن تیوب قرار دهید. 750 میکرولیتر از بافر NW ( مطمئن شوید الکل 96 درصد به این بافر اضافه شده است ) داخل ستون بریزید و یک دقیقه در 12000 دور سانتریفیوژ کنید.
13. محلول جمع شده در داخل کالکشن تیوب را دور ریخته و ستون را دوباره داخل کالکشن تیوب قرار دهید. 500 میکرولیتر از بافر NW داخل ستون بریزید و یک دقیقه در 12000 دور سانتریفیوژ کنید.محلول جمع شده در کالکشن تیوب را دور بریزید.
14. یک بار دیگر ستون خالی داخل کالکشن تیوب را به مدت 2 دقیقه در دور 12000 سانتریفیوژ کنید تا باقی مانده محلول شست و شو کاملا از ستون خارج شود.
15. ستون را به داخل یک کالکشن تیوب ml 1.5 تازه استریل منقل کنید. 150 میکرولیتر بافر EB گرم شده در دمای 65 درجه را به ستون اضافه کنید. به مدت 3 دقیقه در دمای اتاق انکوبه نمایید.
16. ستون را در 12000 دور به مدت 2 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع جمع شده در کالکشن تیوب حاوی DNA خالص است . آن را برای غلظت سنجی و تست خود استفاده کنید یا برای تست های بعدی در دمای 20- درجه نگهداری کنید.
شرکت نوترکیب آزما تشخیص (NAT Biotech) با مسئولیت محدود به شماره ثبت 616171 تولید کننده تخصصی محصولات بیوتکنولوژی مولکولی آماده ارائه کیت ها، مسترمیکسها، مواد و تجهیزات مورد نیاز تست های مولکولی به تمامی محققین و فعالین دانشگاهی در حوزه های پزشکی، زیست شناسی، ژنتیک، کشاورزی، تغذیه و … می باشد.
نظرات
هیچ دیدگاهی نوشته نشده است.