کیت استخراج اگزوزوم از خون | exoNAT

روش کار 

روش کار با این مسترمیکس مشابه تمامی مسترمیکس های خارجی می باشد.
با استفاده از این مسترمیکس یک مرحله فعال سازی آنزیم خواهید داشت و سپس وارد چرخه های تکثیر می شوید.
با استفاده از این مسترمیکس می توانید qPCR دو مرحله ای یا سه مرحله ای را اتخاذ کنید.
توصیه ما این است که در صورت بهینه بودن پرایمر ها و کوتاه بودن توالی از روش دو مرحله ای استفاده کنید.

نکات مهم قبل از شروع:

1) قبل از استفاده بافر  Exo₁را به خوبی میکس کرده تا محلول یکدستی تشکیل شود. در صورت نیاز می‌توانید از ورتکس کمک بگیرید.

2) از آلوده شدن نمونه های شامل پلاسما و یا سرم با مواد دیگری خونی جلوگیری شود.

3) از دستکش در کل روند استفاده کنید.

4) برای استفاده از پلاسما نمونه خون را در لوله CBC حاوی EDTA از نوع K3/K2 ذخیره کنید اما در صورت استفاده از سرم نیازی به لوله CBC حاوی EDTA نیست.

مراحل کار:

1. برای استفاده از پلاسما، لوله CBC حاوی نمونه خون تازه را به مدت 15 دقیقه در دور 2000 سانترفیوژ کنید پس از سانترفیوژ مایع رویی را برداشته و به یک میکروتیوب استریل 1.5 انتقال دهید و دوباره با دور 2000 به مدت 30 دقیقه سانترفیوژ کنید.
2. مایع رویی به دست آمده را به ستون های NATicon انتقال دهید و به مدت 2 دقیقه با دور12000 سانترفیوژ کنید.
3. میزان 400 میکرولیتر از مایع جمع شده در کالکشن تیوب را با 100 ماکرولیتر از بافر Exo₁ ترکیب کرده و تا زمانی که محلول یکسانی بدست آید ورتکس کنید.
4. محلول حاصل را به مدت 1 ساعت در دمای 4 درجه انکوبه کنید و طی این مدت نمونه را دائم شیک کنید.
5. سپس نمونه موجود در میکروتیوب را به مدت 30 دقیقه با دور 10.000 سانترفیوژ کنید.
6. مایع رویی را دور ریخته و پلت تشکیل شده را در 500 میکرولیتر از بافر Exo₂ حل کنید و به مدت 10 دقیقه در دمای 37 درجه انکوبه کنید.
7. مایع موجود شامل اگزوزوم استخراجی شما می‌باشد. می توانید اگزوزوم های خود را مستقیما برای تست های بعدی و همچنین مشخصه یابی با DLS، بررسی مارکرهای سطحی CD9، CD63 و CD81، تصویر برداری میکروسکوپ الکترونی، NTA استفاده کنید یا آن را در دمای منفی 20 درجه سانتی گراد ذخیره کنید.

برای استخراج RNA از اگزوزوم ها می توانید از محصولات ما شامل محلول استخراج RNA کل Norex یا کیت ستونی استخراج NorexPlus استفاده کنید. جهت سنتز cDNA میتوانید از کیت سنتز cDNA کل یا اختصاصی NATscript استفاده نمایید. همچنین جهت بررسی بیان RNAهای خود توسط ریل تایم PCR می توانید از مستر میکس سایبر گرین یا اواگرین RealTiQ یا evaNAT استفاده بکنید.

دانلود کاتالوگ کیت استخراج اگزوزوم از خون | exoNAT