مسترمیکس Redimix | 2x PCR Red Mastermix

مراحل کار:

این مسترمیکس با غلظت 2 برابر تولید شده است لذا با هر حجمی که واکنش PCR انجام می شود باید نصف آن مستر میکس باشد.

برای ساخت واکنش 20 میکرولیتری به ترتیب زیر، مواد را در داخل یک میکروتیوب 0.2 بریزید:

• 10 میکرولیتر مستر میکس RED نوترکیب
• 2 میکرولیتر پرایمر 10 پیکومول فوروارد و 2 میکرولیتر پرایمر 10 پیکومول ریورس
• 2 میکرولیتر DNA الگو
  • 6 میکرولیتر آب گرید PCR

• بعد از ریختن همه موارد ذکر شده، چندین بار محلول را پیپتاژ کرده و سپس اسپین کنید.

  برای انجام واکنش با کارایی بالا از برنامه دمایی مناسب برای شرایط واکنش خود استفاده کنید. در زیر یک برنامه عمومی ارائه شده است که می توانید در بسیاری از موارد آن را بکار ببرید:

  Initial denaturation                                         95 ˚C                   3-5 min

  35 Cycles                                Denaturation        95˚C                      15-30 seconds

                                                  Annealing          55-65˚C             30 seconds

                                                  Extension           68˚C                   30 seconds

  Final extension                                               68˚C                   5-15 min

  Store                                                             4˚C                      30 min

   

  نکته 1) به ازای هر 500 جفت باز ، 30 ثانیه زمان برای اکستنشن در نظر بگیرید.

  نکته 2) برای یافتن بهترین دمای Annealing از گرادیان دمایی برای استفاده کنید.

  بعد از اتمام PCR بدون نیاز به بافر لودینگ می توانید محصول PCR را مستقیما در ژل آگارز  بارگذاری کنید. برای تخمین اندازه قطعه تکثیر شده خود می توانید از لدر 100 یا 50 جفت بازی نوترکیب به مقدار 5-3 میکرولیتر در کنار نمونه های خود استفاده کنید.

• نکته 3) برای قطعات کوتاه تر از 500 نوکلؤتید ضرورتی بر مرحل extension Final نیست.

دانلود کاتالوگ 
مسترمیکس Redimix | ( 2x PCR Red Mastermix )