محلول استخراج RNA کل نورکس
بر پایه فنل
25 میلی لیتر
برای مصارف تحقیقاتی (RUO)
ارائه سمپل رایگان این محصول برای محققان عزیز
- ارسال با یخ و حفظ زنجیره سرمایی
- تحویل کالا برای تهران 1 روز کاری برای شهرستان 2-4 روز
256 در انبار
460,000 تومان–750,000 تومان
استخراج RNA با کمیت و کیفیت بالا یکی از نیازهای اساسی مطالعات زیست شناسی مولکولی و اولین گام در بسیاری از تست‌های معمول آزمایشگاهی است. تخلیص RNA با کیفیت مطلوب برای بسیاری از کاربردهای پایین دست مانند کلونینگ، رونویسی معکوس برای سنتز cDNA، RT-PCR، RT-qPCR، Northern blotting، cDNA microarray و RNA-seq بسیار مهم می‌باشد.
اطلاعات محصول
محلول نورکس برای استخراج RNA کل از سلول و بافت طراحی شده است. این محلول
در اندازه 25 میلی لیتر ارائه می شود و تنها برای مصارف تحقیقاتی (RUO) است.
شرایط نگهداری :
این محلول را می توانید در دمای 2-8 درجه سانتی گراد نگهداری کنید. برای نگهداری های طولانی مدت توصیه می شود در دمای 20- نگهداری شود.
نکات مهم قبل از شروع :
این محلول بر پایه فنل بوده و از دستکش در کل روند کار و در هنگام هموژنایز کردن بافت داخل محلول نورکس از محافظ صورت (شیلد) استفاده کنید.
مراحل کار:
) لیز سلول یا بافت بوسیله محلول نورکس.
** لیز کردن سلول ها: سلول های سوسپانسیونی حاصل از کشت یا حاصل از مایعات بدنی را قبل از لیز سانتریفیوژ کرده و 1 میلی لیتر محلول نورکس را بر روی پلت سلولی بریزید و کاملا با پیپتاژ کردن سلول هارا ریساسپند کنید. برای سلول های چسبنده کشت شده در پلیت ها، محلول نورکس را میتوانید مستقیما داخل ول ریخته و پیپتاژ کنید تا سلول ها در تماس با محلول قرار گیرند.
** لیز کردن نمونه های بافتی: 10-50 میلی گرم بافت تازه یا بافت ذخیره شده را برای استخراج RNA استفاده کنید. اگر بافت ها در محلول محافظت کننده RNA (به عنوان مثال RNAguard از نوترکیب) ذخیره شده اند، قبل از لیز کردن، تمام محلول را از بافت خارج کنید (با استفاده از سانتریفیوژ کردن مختصر یا استفاده از کاغذ واتمن استریل بدون RNase). ابتدا 250 مایکرولیتر محلول نورکس را بر روی بافت بریزید و بافت را کاملا هموژنایز کنید. بعد از هموژنایز کامل (سعی کنید فرایند هموژنایز کردن بیش از 1 دقیقه به طول نیانجامد) 750 مایکرولیتر محلول نورکس را بر روی بافت بریزید و به صورت مختصر پیپتاژ کنید.
2) سلول و بافت هموژن شده را به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید.
3) 200 مایکرولیتر کلروفرم بر روی محلول ریخته و به مدت 10 ثانیه آن را مخلوط کنید و سپس 3 دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید.
4) محلول را به مدت 15 دقیقه در دمای 4 درجه سانتی گراد با دور 12000 سانتریفیوژ کنید.
5) 300-400 مایکرولیتر از محلول رویی (بالاترین فاز که شفاف است) را به آرامی برداشته و در یک میکروتیوب 1.5 سرد شده بر روی کلد رک (یا یخ) بریزید.
6) 500 میکرولیتر ایزوپروپانول بر روی محلول ریخته و به آرامی مخلوط کنید و محلول را به مدت 10 دقیقه بر روی یخ انکوبه کنید.
7) محلول را به مدت 15 دقیقه در دمای 4 درجه سانتی گراد با دور 12000 سانتریفیوژ کنید.
8) مایع رویی را دور بریزید. پلت RNA را در 1 میلی لیتر الکل 75 درصد ریساسپند کنید و بلافاصله به مدت 5 دقیقه در دمای 4 درجه سانتی گراد با دور 8000 سانتریفیوژ کنید.
9) مایع رویی را خارج کرده و اجازه دهید در دمای محیط یا در یک ترموشیکر با دمای 40 درجه سانتی گراد الکل کاملا از ته میکروتیوب بخار شود.
10) 20-50 میکرولیتر آب DEPC treated بر روی پلت ریخته و بعد از چندین بار فینگر تپ کردن اجازه دهید 15-10 دقیقه در دمای اتاق یا دمای 45 درجه بماند.
11) RNA استخراج شده را توسط دستگاه نانودراپ کمیت سنجی کرده و برای استفاده های بعدی می توانید آن را در 80- نگهداری کنید.
شرکت نوترکیب آزما تشخیص (NAT Biotech) با مسئولیت محدود به شماره ثبت 616171 تولید کننده تخصصی محصولات بیوتکنولوژی مولکولی آماده ارائه کیت ها، مسترمیکسها، مواد و تجهیزات مورد نیاز تست های مولکولی به تمامی محققین و فعالین دانشگاهی در حوزه های پزشکی، زیست شناسی، ژنتیک، کشاورزی، تغذیه و … می باشد.
نظرات
هیچ دیدگاهی نوشته نشده است.